La observación de cualquier material al microscopio requiere de un pequeño equipo que no es difícil de obtener bien adquiriéndolo por Internet o en muchas tiendas de Óptica.
PORTAOBJETOS Y CUBREOBJETOS
Cualquier objeto que se quiera observar debe colocarse sobre unos cristales transparentes, rectangulares y finos, de un grosor no superior a 2 mm.
Toda gota de líquido tiende a adquirir la forma hemisférica o cóncava cuya superficie es muy reflectante de la luz por lo que es necesario “aplastarla” con un fino cristalito, el cubreobjetos que es un cuadrado o rectángulo de 1 a 2 cm de lado los más usuales y extremadamente fino, en general menos de 0,2 mm.
Cubreobjetos
PINZAS
Como el material que se usa para observar debe ser siempre muy pequeño nuestros dedos son muy gruesos y pegajosos para manejar los cortes y pequeñas muestras por lo que es necesario disponer de unas pinzas de hierro con punta fina rectas o curvas.
AGUJAS ENMANGADAS
Por las mismas razones que se requiere el uso de pinzas también es necesario el uso de agujas, en unos casos para tomar pequeñas muestras, para manejarlas sobre el portaobjetos, para removerlas en los líquidos de observación y en los colorantes, para ayudar a montar las preparaciones y en general para muchas aplicaciones.
Para la realización manual de cortes microscópicos las mejores cuchillas y más económicas son sin duda las antiguas cuchillas de afeitar con filo biselado y recto. Por supuesto también pueden servir otro tipo de cuchillas como las de barbero o las de los bisturís, aunque estas últimas suelen ser curvas y resultan menos prácticas.
PAPEL SECANTE
Para la limpieza de portaobjetos e incluso de cubreobjetos y sobre todo para la limpieza de las preparaciones, eliminación de los líquidos sobrantes y para los lavados de colorantes es necesario el uso de papel absorbente que puede ser papel secante, papel de cocina, toallitas o incluso papel higiénico doméstico. En todos los casos utilizan material de buena calidad, especialmente en el caso de papel higiénico ya que de lo contrario pueden soltar fibras que ensucian o contaminan las preparaciones.
LENTES DE AUMENTO
Para la manipulación del material y sobre todo para la realización manual de las secciones microscópicos es muy útil el uso de una lupa que disponga de sostenimiento propio para que nos deje libres las manos para la manipulación del material, bien sea una lupa con brazo telescópico, una lupa de mesa con pie flexible o idealmente una lupa de las que se acoplan a las gafas y que se pueden adquirir en cualquier tienda de Óptica. La graduación no tiene que ser excesiva pero cada uno debe probar la que mejor le va.
Lupa de mesa con brazo telescópico
Lupa para adaptación a gafas
Lupa con gafas acopladas
MONTAJE DE PREPARACIONES
Salvo algunos materiales que de por sí contienen mucho líquido y por tanto son muy refringentes, todos los materiales que se quieran observar con un microscopio deben observarse inmersos en un líquido de observación, incoloro o coloreado, pero obviamente transparente. La razón es que todos los objetos son muy poco refringentes y tienden a reflejar la luz y por tanto aparecen muy oscuros por lo que hay que sumergirlos en un líquido que facilite el paso de la luz, por tanto se deben colocar inmersos en un líquido de observación.
Paso a paso:
1. Disponer de una muestra de material suficientemente pequeña o con la ayuda de una cuchilla realizar una sección lo suficientemente delgada para que deje pasar la luz que viene de abajo del microscopio. (Var apartado “Técnicas de cortes”).
2. Con la ayuda de la aguja enmangada o de unas pinzas finas disponer la porción o los cortes sobre el centro de un cristal portaobjetos (procurar siempre no dejar huella de dedo).
3. Añadir una gota de líquido de observación o de colorante. Con la aguja enmangada remojar bien la muestra para que salga todo el aire y dejar uno o varios minutos para que se humedezca y/o coloree adecuadamente en caso de usar colorante.
4. Tomar un cristal cubreobjetos (por los bordes y sin dejar huella digitales) y apoyarlo a un lado de la gota de observación donde está inmerso el material y con ayuda de la aguja enmangada dejar caer despacio el cristal evitando la formación de burbujas.
5. Con la parte roma de la aguja enmangada, con la parte trasera de un bolígrafo, con la uña o con cualquier otro objeto romo y que no deje huella (nunca con el dedo) presionarlo ligeramente para que salga el líquido sobrante. En una primera observación “no” es conveniente presionar mucho el cubreobjetos para observar su estructura y diferentes capas que presenta la muestra, sin embargo para la observación detallada de los elementos que componen, célaulas, vasos conductores, estomas, etc, se procederá a realizar un posterior “escachado” del material presionando el cubreobjetos con un instrumento romo, que puede ser la parte trasera de la aguja enmangada o de un bolígrafo, nuestra uña o mejor una “goma de borrar” comprimir el cubreobjeto para escachar el material, con precaución de no romper el cristalito de cubreobjetos.
6. Si la muestra es demasiado gruesa (lo que no es bueno) o la cantidad de líquido de observación que hemos puesto es escasa nos quedará aire entre los dos cristales que nos impedirá ver adecuadamente ya que el aire siempre se ve negro, en este caso habría que repetir la preparación con unas muestras más finas o añadir más líquido de observación por los bordes hasta que salga todo el aire.
7. Con cuidado eliminar el líquido de observación sobrante por los bordes con el uso de un papel secante.
Cuando usamos colorantes toda la preparación aparece muy coloreada, para un mejor contraste del objeto a observar, más limpieza del medio y sobre todo cuando se quieren realizar fotografías es recomendable lavar el máximo posible de colorante y dejar solo coloreado las muestras de material.
1. Utilizando el mismo gotero del agua de observación poner una gruesa gota en un borde del cubreobjetos y con un papel secante absorber desde el otro lado.
2. Con la aguja enmangada levantar ligeramente el cubreobjetos desde el lado donde se ha puesto la gota de agua para facilitar su penetración.
3. Repetir este proceso cuantas veces sea necesario para disponer de una preparación nítida y volverla a repetir si se ha hecho posteriormente un “escachado” para la observación de estructuras y con el fin de eliminar tanto colorante como material intracelular y extracelular que suelta al desmenuzar el tejido.
4. Si se quiere teñir las propias muestras observadas en agua o potasa o incluso excepcionalmente se quiere proceder a una segunda coloración con el mismo u otro colorante colocar una gota de colorante en el borde del cubreobjetos y proceder como con el lavado, absorberlo desde el otro lado y con la aguja enmangada levantar ligeramente el cristal para facilitar la penetración del colorante. Después proceder nuevamente a un lavado normal como el descrito anteriormente.
TÉCNICAS DE CORTES PARA PREPARACIONES MICROSCÓPICAS
La observación al microscopio exige que los materiales que se van a observar sean los suficientemente delgados para que la luz los atraviese ya que el microscopio a diferencia de la lupa utiliza la luz refractada, es decir que atraviesa el objeto, mientras la lupa utiliza luz reflejada que viene de arriba y rebota en el objeto. Esto exige que se tomen muestras muy diminutas o que se hagan secciones o cortes muy finos que permitan el paso de la luz.
TECNICAS DE CORTES TRANSVERSALES
Para los cortes transversales las técnicas más sencillas que hemos utilizado son básicamente dos:
- Disponer la fina tira de material que se va a seccionar sobre un cristal portaobjetos de microscopio, se sujeta por un extremo con la punta del dedo y con una cuchilla de las antiguas de afeitar, mejor que con una cuchilla de bisturí, apoyada en el mismo dedo se realizan varios cortes que dejen fino “hilos” del material.
- También se pueden utilizar dos cuchillas juntas y aprovechando el bisel del corte simplemente llevar a cabo un corte transversal de la tira de material y con la punta de una aguja retirar el fino hilo que quedará adherido al corte de la cuchilla.
Para realizar estos cortes es recomendable utilizar una simple lupa provista de brazo flexible o mejor unas lentes de aumento (más o menos según el gusto de la persona) que se acoplan a las gafas normales, ambas cosas pueden adquirirse en una tienda de Óptica.